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超低溫保存應用:適應于一系列細胞、組織和有機體(例如細菌、酵母、血紅細胞、雜交瘤、哺乳動物配子和高等植物培養(yǎng)細胞),并且已成功地開發(fā)其商業(yè)價值,特別是牛精zi和胚胎,以及近的軟體動物幼體。冰凍配子和胚胎在人類生育管理上的作用也變得越來越重要了。液氮罐
冰凍和解凍對大多數(shù)細胞都是嚴重的脅迫,通過控制冷凍和解凍的速度、以及改變細胞和細胞質(zhì)的化學環(huán)境來改變。冰凍配子和胚胎在人類生育管理上的越來越重要。了解超低溫保存的注意事項:
在冰凍過程中,主要的脅迫來自:①暴露在低溫下;②冰晶的機械、物理效應;③胞外溶液性質(zhì)的改變;④胞內(nèi)溶液類似性質(zhì)的改變。
超低溫損傷的一個原因,可能是細胞本身沒有結冰時溫度下降對細胞結構和功能的影響。若發(fā)生這種直接的低溫損傷,則在降溫過程中會很快地表現(xiàn)出來并取決于冷凍速度,隨冷凍速度增加而增加。這種損傷在很多細胞包括細菌、酵母、原生生物、藻類、高等植物和哺乳類細胞系中都可觀察到。
在水溶液環(huán)境的細胞系統(tǒng)中,冷凍速度慢將導致胞外結冰,而細胞仍未結冰,不過已處于超冷卻狀態(tài)(即處于溶液冰點以下,但無冰晶形成)。胞外結冰的主要后果是溶質(zhì)從冰晶中排出,并在剩余的液體部分積累。這小部分溶液很快積累大量溶質(zhì),因而對細胞造成了高滲環(huán)境,以致未結冰細胞的滲透脅迫也就增加 (圖1)。細胞的反應表現(xiàn)為失水、體積減少,并且因細胞膜的表面積減少可能遭受一系列機械損傷。這些損傷包括由于細胞收縮引起質(zhì)膜物質(zhì)丟失,這可能導致解凍過程中隨著細胞恢復其原來的體積而發(fā)生胞溶作用。顯然,在這種低溫脫水過程中,未冰凍細胞的細胞質(zhì)將更加濃縮,其細胞器將和整體細胞一樣遭受后面損傷性的滲透脅迫效應。細胞外的冰晶和未結冰溶液將同時存在,直至達到溶液的共溶溫度,在這種溫度下,溶質(zhì)開始晶體化。液氮罐